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產品介紹
產品特征
轉染效率高;細胞毒性低;無需換液,操作簡單。
1.細胞鋪板
提前一天將細胞種植在6孔板中,以轉染時細胞密度30%-70%為宜。
2.siRNA制備(可選)
使用RNase-free ddH20 溶解 siRNA干粉,終濃度為 20 uM。
即使用125 plddH20溶解10D(約 33 g 或2.5 nM) siRNA干粉充分震蕩使其溶解
3.轉染合體制備
1)準備2個無菌 EP 管,各加入100 pL OPTI-MEM 培養液,
2)第一管加入5pL Neofect,輕柔混合10次。
3)另一管加入5uLsiRNA(20pM)溶液,振蕩混勻。4)將 Neofect混合液滴加到 siRNA 合液中,輕柔混,室溫靜置 30 min,轉染復合體制備完成4.細胞轉染
4.細胞轉染
1)轉染:將轉染復合體滴加入細胞培養液中,輕搖混勻,轉入CO2培養箱中繼續培養。
2)換液(可選):若有明顯細胞毒性,轉染 12-24 h,更換成新鮮的細胞培養液。
3)驗證:轉染24-48 h,利用qPCR或Western blot 檢測目的甚因表達水平
培養器皿 |
20uM siRNA(ul) |
Neofect(ul) |
OPTI-MEM(ul) |
24孔板 |
1(1-3) |
1(1-1.5) |
50(50-100) |
6孔板 |
5(4-12) |
5(4-6) |
100(100-200) |
Φ35mm培養皿 |
5(4-12) |
5(4-6) |
100(100-200) |
Φ60mm培養皿 |
8(6-24) |
8(6-12) |
200(200-400) |
按照Neofect與siRNA(20uM)=1:1的體積混合,不同細胞可適當提高siRNA的用量進行優化。
常溫運輸,儲存于4℃,有效期18個月。